一、概述及臨床意義
內(nèi)皮素是一種（類）由內(nèi)皮細(xì)胞合成的生物活性肽，由21個(gè)氨基酸構(gòu)成。哺乳類動(dòng)物能合成四種內(nèi)皮素，包括et-1、et-2、et-3和小鼠內(nèi)皮素。它們均具有強(qiáng)烈的收縮血管、加強(qiáng)心肌收縮力、加強(qiáng)平滑肌收縮和促進(jìn)神經(jīng)內(nèi)分泌功能等作用。其中又以et-1（以下簡(jiǎn)稱et）活性zui強(qiáng)。內(nèi)皮素分布于血管平滑肌、腎、心、肺、腦、脊髓灰質(zhì)、神經(jīng)、肝、脾、腸、氣管以及生殖系統(tǒng)之中，同這些器官上的特異受體有高度親和力。很多物理、化學(xué)和生物因素均能刺激et的大量釋放，參加機(jī)體的多種病理生理過程?，F(xiàn)已證實(shí)，et的釋放同心血管疾病、神經(jīng)內(nèi)分泌疾病、呼吸系統(tǒng)疾病、消化系統(tǒng)及神經(jīng)系統(tǒng)疾病有密切關(guān)系，同時(shí)，在創(chuàng)傷、感染和休克等損傷過程中也發(fā)揮重要作用。目前，國(guó)內(nèi)外均已開始將et水平作為臨床觀察上述系統(tǒng)疾病發(fā)生、發(fā)展的重要生化指標(biāo)。
本藥盒用于測(cè)定人血漿中的et含量，屬于體外放免診斷藥盒。
二、測(cè)定原理
應(yīng)用競(jìng)爭(zhēng)機(jī)制原理，標(biāo)準(zhǔn)或樣品中的et和加入的125i-et 共同與一定量的特異性抗體產(chǎn)生競(jìng)爭(zhēng)性免疫反應(yīng)。125i-et與抗體的結(jié)合量與標(biāo)準(zhǔn)或樣品中et的含量呈一定的函數(shù)關(guān)系。用免疫分離試劑（p.r.）將結(jié)合部分（b）與游離部分（f）分離后，測(cè)定結(jié)合部分的放射性強(qiáng)度，并計(jì)算相應(yīng)結(jié)合率b/b0。用已知標(biāo)準(zhǔn)et含量與對(duì)應(yīng)結(jié)合率作圖，即得標(biāo)準(zhǔn)抑制曲線。從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查知對(duì)應(yīng)結(jié)合率的待測(cè)樣品中et的含量。
三、藥盒組成
規(guī)格
組分
100管
50管
制品狀態(tài)
et標(biāo)準(zhǔn)品（s1-s5）
5瓶
5瓶
凍干品
125i-et（紅色）
2瓶
1瓶
凍干品
兔抗-et抗血清（蘭色）
1瓶
1瓶
凍干品
驢抗兔免疫分離劑
1瓶/55ml
1瓶/28ml
液體
et緩沖液
1瓶/40ml
1瓶/40ml
液體
edta抗凝劑
1瓶/3ml
1瓶/3ml
液體
四、試劑的配制、使用方法和保存
1． et標(biāo)準(zhǔn)品：使用前用緩沖液1ml充分溶解，搖勻。凍干品2~8℃避光保存，在標(biāo)識(shí)的有效期內(nèi)穩(wěn)定；復(fù)溶后-20℃保存在該批藥盒有效期內(nèi)穩(wěn)定。
2． 125i-et：使用前每瓶用5.5ml緩沖液溶解，搖勻。如一次加樣超過50管，兩瓶溶解后合并使用。凍干品2~8℃避光保存，在標(biāo)識(shí)的有效期內(nèi)穩(wěn)定；復(fù)溶后-20℃保存在該批藥盒有效期內(nèi)穩(wěn)定。
3．兔抗-et 抗體：使用前用緩沖液（100管 ml，50管 ml） 溶解，搖勻。凍干品2~8℃保存在標(biāo)識(shí)的有效期內(nèi)穩(wěn)定；復(fù)溶后2~8℃保存在該批藥盒有效期內(nèi)穩(wěn)定。
4．驢抗兔免疫分離劑：2~8℃保存，在標(biāo)識(shí)的有效期內(nèi)穩(wěn)定。加樣前必須充分搖勻！
5． et緩沖液：2~8℃保存，在標(biāo)識(shí)的有效期內(nèi)穩(wěn)定。
6． edta抗凝劑：液體，直接使用。如果有沉淀析出，搖勻后置溫育箱中加熱待其溶解后使用。置2~8℃或室溫保存皆可，在標(biāo)識(shí)的有效期內(nèi)使用。
注：標(biāo)準(zhǔn)品、標(biāo)記物復(fù)溶并加樣完畢后要及時(shí)放在-20℃條件下冰凍保存，保證下次使用時(shí)的可靠性。
五、樣本處理
取靜脈血2ml，拔下針頭后，沿管壁慢慢注入含10%edta 30ul帶塞的試管中，上下顛倒兩次，混勻。室溫放置約1小時(shí)或4℃放置約2小時(shí)后，3000rpm離心10分鐘（室溫或4℃皆可），分離血漿，待測(cè)。如不立即測(cè)量，可將樣本密封后，置于2~8℃或-20℃儲(chǔ)存?zhèn)錅y(cè)，2~8℃保存不應(yīng)超過12小時(shí)，-20℃保存不超過2個(gè)月，-70℃保存不超過6個(gè)月。冰凍樣品測(cè)定前，使樣本置于室溫或常溫水中復(fù)融，測(cè)定前將樣品充分搖勻。
六、測(cè)定步驟
取圓底聚苯乙烯試管若干，用記號(hào)筆或特殊鉛筆編號(hào)t、nsb，s0~s5和待測(cè)樣品管等，然后用微量加樣器按下表加樣。加樣前所有試劑包括血漿樣品平衡到室溫并充分搖勻！
操作程序表 單位：μl
管別
試劑
總t
nsb
s0
s1~s5
待測(cè)樣品
緩沖液
—
200
100
—
—
et標(biāo)準(zhǔn)品
—
—
—
100
—
待測(cè)樣品
—
—
—
—
100
125i-et
100
100
100
100
100
兔抗-et 抗體
—
—
100
100
100
搖勻，4~8℃溫育18~24小時(shí)。
驢抗兔免疫分離劑
—
500
500
500
500
充分搖勻，室溫放置15分鐘，3500轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘，吸棄上清，測(cè)各沉淀管的放射性計(jì)數(shù)（cpm）。
七、數(shù)據(jù)處理
1. 聯(lián)機(jī)處理：由電腦自動(dòng)處理得出結(jié)果。注意放射免疫方法和免疫放射方法由于原理不同，處理軟件也不一樣，用戶一定要使用適合的處理軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。在此建議用戶使用logit-log或四參數(shù)數(shù)據(jù)處理模式。
2. 手工作圖或計(jì)算器處理：
1）. 百分結(jié)合率計(jì)算：設(shè)s0管計(jì)數(shù)為b0，各標(biāo)準(zhǔn)管或樣品管計(jì)數(shù)為b，非特異管計(jì)數(shù)為nsb，則百分結(jié)合率計(jì)算公式為：b/ b0=（b－nsb）/（ b0－nsb）×100%
2）. logit計(jì)算:各標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)或樣品管的logit值計(jì)算公式為： logit=ln（b/ b0）/（1－b/ b0）
3）. 手工作圖：以標(biāo)準(zhǔn)濃度取log值為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的logit值為縱坐標(biāo)在普通坐標(biāo)紙上或以標(biāo)準(zhǔn)濃度為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的b/b0為縱坐標(biāo)在logit-log坐標(biāo)紙上畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線（理想化時(shí)是一條直線）。根據(jù)待測(cè)樣品的b/b0可以從坐標(biāo)紙上查出樣品的濃度值。注意：如果使用普通坐標(biāo)紙，查出的數(shù)值應(yīng)取反對(duì)數(shù)才是zui后的濃度值。
4）. 計(jì)算器處理：使用有線性擬合功能的計(jì)算器，可以比較方便地計(jì)算出樣品濃度值，具體操作方法請(qǐng)查閱計(jì)算器的使用說明書。
標(biāo)準(zhǔn)曲線舉例（僅供參考，不得用于實(shí)際計(jì)算）。
項(xiàng)目
b/t
b/b0（濃度單位ng/ml）
nsb
零標(biāo)準(zhǔn)
20
60
180
540
1620
%
1.5
55.6
88.4
74.1
51.5
29.1
13.4
八、藥盒主要技術(shù)指標(biāo)
1．標(biāo)準(zhǔn)范圍：20~1620pg/ml
2．靈敏度：5pg/ml
3．批內(nèi)變異系數(shù)（cv）：<10%; 批間變異系數(shù)（cv）：<15%。
4．使用期限：見產(chǎn)品外包裝。
九、參考正常值：
參考正常值：53.14±15.23pg/ml
由于地區(qū)及使用儀器不同，所測(cè)的正常值會(huì)存在一定的差異，所以本說明書提供的正常值僅作參考，各實(shí)驗(yàn)室能建立符合本實(shí)驗(yàn)室要求的正常值范圍。